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    Rh(D)血型鉴定SOP

    时间：2020-10-07 11:58:08 来源：蒲公英阅读网 本文已影响人 蒲公英阅读网手机站

    相关热词搜索：血型 鉴定 Rh

    　二、R Rh h （D D ）血型鉴定 操作规程

    　[ 目的]

    　 保证 Rh（D）血型鉴定准确，确保临床输血安全。

    　[ 适用范围]

    　 XXX 医院输血科 [ 职责]

    　 输血科具有专业技术的工作人员主要负责本院输血（或备血）标本的 Rh（D）血型鉴定（只对该单份标本负责）。

    　[ 相关文件]

    　 试剂采购、保存和使用管理程序

    　 设备采购、使用管理程序

    　 消毒与清洁管理程序

    　 标本采集、运输、保存和报废管理程序 紧急用血管理程序 [ 相关记录]

    　 仪器设备的采购、使用和维护记录

    　 仪器的温度记录

    　 恒温水温箱的换水和消毒记录

    　 消毒液的配置记录

    　 清洁消毒记录

    　 试剂采购、使用记录

    　 标本交接和报废记录

    　 紧急用血记录 [ 实验原理] Rh（D）血型是由红细胞表面是否存在或缺失 D 抗原来确定的。D 抗原与细胞株 BS226 细胞产生的单克隆抗体发生特异性反应。红细胞与抗-D 抗体发生特异性凝集反应表明该细胞有 D 抗原，称为 Rh（D）阳性；反之，无特异性凝集现象表明试验的红细胞缺少正常强度的 D 抗原，称为 Rh（D）阴性。

    　[ 仪器器械] 玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、普通离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。

    　[ 试剂] 抗-D 试剂 [ [ 标本收集与处理] ]

    　无菌操作采集血液标本,采集后的标本尽可能立即进行实验。如果不能立即实验,应将标本储存于 2-8C 冰箱内。收集在 ACD、CPD、CPD－2A 液中的血液标本,不超过 21 天仍可进行实验，但是加 EDTA、肝素和凝集的血液标本，实验应在 2天内进行。

    　[ 实验方法与步骤] 1 1 、盐水试管法

    　①、 正常 D D 抗原表型检测 Ⅰ、制备受检者 2~5%红细胞悬液。

    　Ⅱ、取一只干净玻璃试管，加 1 滴抗 D 试剂。

    　Ⅲ、加入 1 滴受检者 2~5%红细胞悬液。

    　Ⅳ、混匀后，1000rpm 离心 1 分钟或 3400rpm 离心 20 秒。

    　Ⅴ、轻轻振荡，悬浮沉积细胞，肉眼观察有无凝集反应，若肉眼观察有凝集反应，则判定为 Rh（D）阳性；若肉眼观察无法判断有无凝集反应，则应混匀后用低倍镜进行观察。

    　Ⅵ、若镜下观察有凝集反应，则仍判定为 Rh（D）阳性；若镜下观察无凝集反应，则应继续进行下列操作：

    　Ⅶ、混匀后进行 37℃水浴 15 分钟。

    　Ⅷ、1000rpm 离心 1 分钟或 3400rpm 离心 20 秒。

    　Ⅸ、轻轻振荡，悬浮沉积细胞，肉眼观察有无凝集反应，若肉眼观察有凝集反应，则仍判定为 Rh（D）阳性；若肉眼观察无法判断有无凝集反应，则应再混匀后用低倍镜进行观察。

    　若镜下观察有凝集反应，则仍判定为 Rh（D）阳性；若镜下观察仍无凝集反应，则判定为 Rh（D）阴性，需要时还应进行弱 D 表型检测实验。

    　②、弱 弱 D D 表型抗原检测

    　Ⅰ、操作步骤与上述盐水试管法检测正常 D 抗原表型相同。如果先前已进行了盐水试管法实验，同一试管可直接用弱 D 表型检测实验。

    　Ⅱ、混匀后，37℃水浴 15 分钟。

    　Ⅲ、用干净的等渗盐水洗涤细胞至少 4 次，洗涤后充分将盐水弃掉。

    　Ⅳ、加 2 体积广谱抗人球蛋白于细胞试管中。

    　Ⅴ、轻轻混匀，500Xg 低速离心 15 秒。

    　Ⅵ、轻轻振荡，悬浮沉积细胞，肉眼观察有无凝集反应，若肉眼观察有凝集反应，则判定为 Rh 血型弱 D 抗原阳性；若肉眼观察无法判断有无凝集反应，则应混匀后用低倍镜进行观察。

    　若镜下观察有凝集反应，则仍判定为 Rh 血型弱 D 抗原阳性；若镜下观察无凝集反应，则判定为 Rh（D）阴性。

    　2 、玻片法：

    　①、干净玻片上加 1 滴抗 D 试剂。

    　②、再加入 1 滴 35-45%的受检者红细胞悬液。

    　③、用干净涂棒，将试剂和血液充分混匀。

    　④、在一个照亮的观察箱上方轻轻前后倾斜玻片，观察凝集反应。并在显微镜下镜检证实。

    　⑤结果判断：有凝集时，表明所测的红细胞带有 D 抗原，判定为 Rh（D）阳性；无凝集时，表明所测的红细胞缺少正常强度的 D 抗原，判定为 Rh（D）阴性，但对于献血员应经过间接抗人球蛋白试验确定是否存在弱 D 表型。

    　[ 质量控制和注意事项] 1、抗 D 诊断试剂开封后，及时贴上开封时间标签，在效期内使用。

    　2、由于人红细胞的 D 抗原往往表现较弱，故必要时进行显微镜镜检，以免错判结果，特别是阴性结果时。

    　3、Rh 血型鉴定应严格控制温度与时间，因 Rh 抗原、抗体集反应凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。

    　4、对于结果可疑的，必须洗涤红细胞后重新检验。

    　5、2~5%红细胞悬液的配制：先用生理盐水洗涤红细胞 3 次，再根据下表进

    　行红细胞悬液的配制。

    　悬液浓度（%）

    　压积红细胞（滴）

    　盐水（滴）

    　2 1 40(2ml) 5 1

    　16 (0.8ml) 6、抗-D（RH1）226 单克隆抗体是由 BS226 细胞克隆的细胞培养上清制备，是 IgM 类免疫球蛋白人源单克隆抗体，因此不能用于间接抗球蛋白试验。

    　7、应该使用新鲜的、非溶血的血标本，可以是未加抗凝剂的血标本，或是加入抗凝剂 EDTA 或枸橼酸的血标本。必要时应使用经过加入等渗盐水离心（1000g，2 分钟）洗涤后的标本所制备的红细胞悬液。推荐在制备红细胞悬液前，洗涤红细胞两遍，或洗涤上清至清澈。高脂肪性、黄疸性或微生物污染的标本可能会导致检测结果错误，因此应尽量避免使用。

    　8、应用试管法鉴定时，应同时平行进行阳性和阴性对照试验。

    　9、判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。

    　10、其它附注参见 ABO 血型鉴定和 Rh（D）血型试剂说明书。

    　[ [ 假阳性反应原因分析] ]

    　1、试剂中存在具有其他特异性抗体（指不完全 D 抗体），因此对疑难抗原定型时，建议用不同来源的抗血清同时做两份试验。因为使用两份特异性相同的抗血清得到不一致的结果时，就会使检验人员意识到有进一步试验的必要。

    　2、多凝集红细胞与任何人血清都会发生凝集。

    　3、当用未经洗涤的红细胞做试验时，标本中的自由凝集素和异常蛋白质可能引起假阳性结果。

    　4、试剂瓶可能被细菌、外来物质或其他抗血清所污染。

    　[ [ 假阴性反应原因分析] ]

    　1、看错抗血清，每次试验时应细心核对抗血清瓶上的标签。

    　2、试管中漏加抗血清，在加入红细胞悬液之前，必须检查试管中有无抗血清。

    　3、某种特定的抗血清不能和与其相对应抗原的变异型起反应。

    　4、如某种抗血清含有主要对抗 Rh 复合抗原的抗体则可能与独立的基因产物的个别抗原不发生反应。

    　5、遵照抗血清使用说明书进行操作，如抗血清和红细胞悬液间比例以及反应温度和时间不准确。

    　6、抗血清保存不妥，试剂中的免疫球蛋白变质。

    　[ [ 临床应用] ] 用于常规检测人的 Rh（D）血型归属。

    　 XXX 医院输血科 编写者 审批者 保管者 操作人员

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