淀粉糊化度测定方法
颗粒饲料中淀粉糊化度的测定
一、 淀粉糊化度说明:
饲料配方中玉米的用量一般在 45%以上,而玉米中淀粉含量通常为 64%~78% ,即淀粉在全价饲料中占有较大比重,产品的颗粒化的目的之一就是使原料的淀粉糊化,其作用除可改善物料的流变加工特性外,更为重要的是能在一定程度上提高畜禽对能量物质的消化吸收效果、饲料转化效率,以及畜禽生长性能。因此,淀粉糊化作用是饲料加工过程中重要的物理化学特性变化过程,而快速准确检测和实时监控饲料加工中原料淀粉糊化特性的变化,对提高饲料加工及产品质量,降低生产成本具有十分重要的意义。
二、 适用范围
糊化度是指淀粉中淀粉与全部淀粉量之比的百分数
三、 原理
β-淀粉酶在适当的 PH 和温度下,能在一定的时间内,定量的将糊化淀粉转化成还原糖,转化的糖量与淀粉的糊化程度成比例关系。用铁氰化钾法测定其还原糖量,即可计算出淀粉的糊化度
四、试剂和溶液
(1)10%磷酸缓冲液 甲液:溶解 71.64g 磷酸氢二钠于蒸馏水中,并稀释至 1000ml 乙液:溶解 31.21g 磷酸二氢钠于蒸馏水中,并稀释至 1000ml 取甲液 49ml、乙液 51ml 合并为 100ml,再加入 900ml 蒸馏水即为 10%磷酸缓冲液。
(2)6% β-淀粉酶溶液(活力大于 10 万单位)
溶解 6.0g β-淀粉酶(精制)于 100ml10%磷酸缓冲液中成乳浊液。(β-淀粉酶储存于冰箱或干燥器内,用时现配)
(3)1.79mol/L 硫酸溶液 将 10ml 浓硫酸于蒸馏水稀释至 100ml (4)12%钨酸钠溶液 溶解 12.0g 钨酸钠于 100ml 蒸馏水中
(5)碱性铁氰化钾溶液 溶解 32.9g 铁氰化钾和 44.0g 无水碳酸钠于蒸馏水中
并稀释至 1000ml,贮于棕色瓶中
(6)乙酸盐溶液
溶解 77.0g 氯化钾和 40.0 硫酸锌于蒸馏中加热溶解,冷却至室温,再缓缓加入 220ml 冰乙酸并稀释至 1000ml
(7)10%碘化钾溶液
溶解 10.0g 碘化钾于 100ml 蒸馏水中,加入几滴饱和氢氧化钠溶液,防止氧化,贮于棕色瓶中
(8)0.05mol/L 硫代硫酸钠溶液 溶解 24.82g 硫代硫酸钠和 3.8g 硼酸钠于蒸馏水中,并定容至 1000ml,贮存于棕色瓶中(此溶液一周后使用)
(9)10g/L 淀粉指示剂
溶解 1.0g 可溶性淀粉于煮沸的蒸馏水中,在煮沸 1min,冷却,稀释至 100ml 五、仪器设备
(1)分析天平 感量 0.1mg
(2)多空恒温水浴锅
(3)烧杯、容量瓶、量筒、滴定管(碱式)、漏斗等不同规格的玻璃仪器
(4)中速定性滤纸 六、测定步骤
(1)分别称取试样 1g(精确至 0.0002g,淀粉含量不大于 0.5g)4 份,置于四只150ml 三角瓶中,标上 A1、A2、B1、B2.另取两个 150ml 三角瓶不加试样,作空白,并标上C1、C2。在这 6 只三角瓶中各用 50ml 量筒加入 40ml 10%磷酸缓冲液。
(2)将 A1、A2 置于沸水浴中煮沸 30min,取出快速冷却至 60℃以下
(3)将 A1、A2、B1、B2、C1、C2 置于 60℃恒温水浴锅中预热 3min 后,各用 5ml 移液管加入 5ml 6%β-淀粉酶,保温(60℃)1h(每隔 15min 轻轻摇匀一次)
(4)1h 后,将 6 只三角瓶取出,用移液管分别加入 2ml 1.79mol/l 硫酸溶液,摇匀。再加入 2ml 2%钨酸钠溶液,摇匀。并将他们分别全部转移到 6 只 100ml 容量瓶中(用蒸馏水荡洗三角瓶 3 次以上,荡洗液也转移至相应的容量瓶中)。最后,蒸馏水定容至 100ml,并贴上标签
(5)摇晃容量瓶,静置 2min 后,用中速定性滤纸过滤,留滤液作为测定溶液
(6)用 5ml 移液管分别吸取上述溶液 5ml,放入洁净的并贴有相应标签的 150ml 三角瓶内,在用 15ml 移液管加入 15ml 0.1mol/l 碱性铁氰化钾溶液,摇匀后,置于沸水浴中准确加热 20mim 后取出,用冷水快速冷却至室温,用 25ml 移液管缓慢加入 25ml 乙酸盐溶液并摇匀。
(7)用 5ml 移液管加入 5ml 10%碘化钾溶液摇匀,立即用 0.05mol/l 硫酸硫代钠溶液滴定,当溶液颜色变成淡黄色时,加入几滴 10g/l 淀粉指示剂,继续滴定到蓝色消失,各三角瓶分别逐一滴定,并记下滴定量 a1、a2、b1、b2、c1、c2 ml 七、测定结果的计算和表述
计算:所测试样糊化度两次平行测定结果为:
a1={(c-b1)/(c-a1)}*100%
a2={(c-b2)/(c-a2)}*100%
最后以两次平行测定的平均值:
a =(a1+a2)/2 作为试样的糊化度 式中:a1、a2----;两次平行测定的糊化度,%
C----空白滴定 c1、c2 的平均值,ml,c=(c1+c2)/2
a1、a2、b1、b2--为 6,7 得的结果,ml;
a --所测试样的糊化度,%,所得结果取整数。
八、精密度
双试验的相对偏差:糊化度在 50%以上,不超过 10%;糊化度在 50%以下时,不超过 5%。
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