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    淀粉含量与糊化度测定

    时间：2020-12-08 20:19:20 来源：蒲公英阅读网 本文已影响人 蒲公英阅读网手机站

    相关热词搜索：淀粉 测定 含量

    　淀粉糊化度的测定 一、仪器：

    　分析天平，恒温水浴锅，分光光度计。

    　二、试剂：

    　1、缓冲液：用移液管吸取 3.1ml 的冰醋酸，并称取 4.1g 的无水乙酸钠。将二者用水溶解 稀释，定容至 1000ml。必要时可加入乙酸或乙酸钠调整 PH 值至 4.5±0.05。

    　2、酶试剂：CAS：9032-08-0，最终保证溶液中含粗制酶约 180unit/ml。

    　3、蛋白沉淀剂：

    　A；10%的 ZnSO 4 溶液（W/V）：称取 10g ZnSO 4 · 7H 2 O 溶解于少量蒸馏水中。并定容至,100ml。

    　B：0.5mol/L 的 NaOH 溶液：称取 2g 的 NaOH（AR），并溶解于少量蒸馏水中，最终定 容至 100ml。

    　C：铜试剂：称取 40g 无水 Na 2 CO 3 ，溶解于 400ml 水中，加入 7.5g 酒石酸。待溶解后加入 4.5g 的 CuSO 4 .5H 2 O，溶解后混合均匀，最终定容至 1000ml。然后用棕色瓶保存。

    　4、磷钼酸试剂：首先配制 400ml10%的 NaOH，再将 400mlNaOH 溶液与 100ml 蒸馏水混 合，并向其中加入 70g 钼酸（AR，CAS：7782-91-4）和 10g 钨酸钠（AR，CAS：13472-45-2）； 溶解后加热煮沸 20—40min。这是为了赶走其中的 NH3，之后冷却至室温。加蒸馏水大 约 700ml，再向其中加入 250ml 浓的正磷酸（85%的磷酸），最后定容至 1000ml。然后 用棕色瓶保存。

    　三、实验步骤：

    　1、样品的预处理：

    　先将风干样品细磨碎并全部过 20 目筛网，根据样品含淀粉程度不同定量取样品（纯 淀粉 100mg、含量 60%以上 150mg、含量 30-60%200mg、含量 15-30%300mg、含量 15% 以下 400mg）共称取样品两份，分别置于 25ml 刻度试管中。

    　向其中一支试管中加入 15ml 缓冲液（确保样品全部溶解且样品不粘在液面试管壁上， 建议先吸 5ml，振摇溶解后，再将 10ml 沿管壁注入，冲洗粘在管壁上的样品），注意此时的液面位置（用笔在试管外做记录）。混匀后置于沸水浴中加热 1h（为防止样品粘糊在液 面上的管壁，建议开始半个小时，管外沸水浴液面高度为试管液面的一半），其间摇动 2-3 次（摇动过程用一手固定试管的上段，一手在试管下半段用高频敲振的方式，使沉淀在底 部的样品旋震上浮，防止样品粘到液面上管壁），经过此步处理就得到了全糊化淀粉。用 自来水冷却试管，滴加适量的蒸馏水使液面恢复到加热前的位置，此时再向另一支试管中 加入 15ml 缓冲液。之后两支试管就可以同时进行以下步骤。

    　分别向两支试管中加入 1ml 酶溶液。再另取一支空白试管加入 15ml 缓冲液和 1ml 酶 溶液，作为空白管。将几支试管在 40℃水浴中保温 1h，起初摇动 1 次，以后每 15min 摇 动 1 次。或是在水浴摇床上保温。

    　保温结束后，加入 2ml10%ZnSO 4 · 7H 2 O，混匀后再加入 1ml 0.5mol/LNaOH。加水稀 释到 25ml，混匀之后过滤，用微量加样器准确吸取 0.3ml 滤液置于 25ml 刻度试管中，并 加入 2ml 铜试剂，混匀。将试管置于沸水浴中加热 6min ，保持沸腾，加入 2ml 磷钼酸 试剂，之后继续加热 2min（从加入沸水浴开始严格按照时间加入试剂和移出冷却，用秒 表计时）。用自来水将试管冷却，加蒸馏水至 25ml，盖上瓶盖混匀。用分光光度计在 420nm 下读取吸收值，并记录。

    　四、计算公式

    　 淀粉含量的测定 一、仪器：

    　分析天平，恒温水浴锅，分光光度计。

    　二、试剂：

    　1、缓冲液：用移液管吸取 3.1ml 的冰醋酸，并称取 4.1g 的无水乙酸钠。将二者用水溶解 稀释，定容至 1000ml。必要时可加入乙酸或乙酸钠调整 PH 值至 4.5±0.05。

    　2、酶试剂：CAS：9032-08-0，最终保证溶液中含粗制酶约 180unit/ml。

    　3、蛋白沉淀剂：

    　A：10%的 ZnSO 4 溶液（W/V）：称取 10g ZnSO 4 · 7H 2 O 溶解于少量蒸馏水中。并定容至 100ml。

    　B：NaOH 溶液：称取 2g 的 NaOH（AR），并溶解于少量蒸馏水中，最终定容至 100ml。

    　C：铜试剂：称取 40g 无水 Na 2 CO 3 ，溶解于 400ml 水中，加入 7.5g 酒石酸。待溶解后加入 4.5g 的 CuSO 4 .5H 2 O，溶解后混合均匀，最终定容至 1000ml。

    　4、磷钼酸试剂：首先配制 400ml10%的 NaOH，再将 400mlNaOH 溶液与 100ml 蒸馏水混 合，并向其中加入 70g 钼酸（AR，CAS：7782-91-4）和 10g 钨酸钠（AR，CAS：13472-45-2）； 溶解后加热煮沸 20—40min。这是为了赶走其中的 NH 3 ，之后冷却至室温。加蒸馏水大 约 700ml，再向其中加入 250ml 浓的正磷酸（85%的磷酸），最后定容至 1000ml。然后 用棕色瓶保存。

    　三、建立葡萄糖标准曲线 试验当天溶解 100mg 纯葡萄糖于 70ml 蒸馏水中（葡萄糖最低选用 AR 级，湿基配制， 同时测定水分计算干基），稀释至 100ml，即是葡萄糖标准液（约 1mg/ml，扣除葡萄糖水 分可得到精确浓度）。吸取 0.0ml、0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml 标准葡萄糖 溶液（1mg/ml）分别置于各有 2ml 铜试剂的试管中，混匀。

    　将试管中置于沸水浴中加热 6min，保持沸腾。加入 2ml 磷钼酸试剂，之后继续加热 2min，用自来水将试管冷却（从加入沸水浴开始严格按照时间加入试剂和移出冷却，用秒 表计时），加蒸馏水定容至 25ml，盖上瓶盖混匀。用分光光度计在 420mn 测量其吸收值， 并记录。

    　四、实验步骤：

    　先将风干样品细磨碎并全部过 20 目筛网，根据样品含淀粉程度不同定量取样品（确 保最后吸光值在 0.5 左右，例如淀粉含量 50%的样品，建议称量 80-100mg），置于 25ml 刻度试管中。

    　向试管中加入 15ml 缓冲液（确保样品全部溶解且样品不粘在液面试管壁上，建议先 吸 5ml，振摇溶解后，再将 10ml 沿管壁注入，冲洗粘在管壁上的样品），注意此时的液面 位置（用笔在试管外做记录）。混匀后置于沸水浴中加热 1h（为防止样品粘糊在液面上的 管壁，建议开始半个小时，管外沸水浴液面高度为试管液面的一半），其间摇动 2-3 次（摇 动过程用一手固定试管的上段，一手在试管下半段用高频敲振的方式，使沉淀在底部的 样品旋震上浮，防止样品粘到液面上管壁），经过此步处理就得到了全糊化淀粉。用自来 水冷却试管，滴加适量的蒸馏水使液面恢复到加热前的位置。

    　向试管中加入 1ml 酶溶液。再另取一支空白试管加入 15ml 缓冲液和 1ml 酶溶液，作

    　为空白管。将试管在 40℃水浴中保温 1h，起初摇动 1 次，以后每 15min 摇动 1 次。或是 在水浴摇床上保温。

    　保温结束后，加入 2ml10%ZnSO 4 · 7H 2 O，混匀后再加入 1ml 0.5mol/LNaOH。加水稀 释到 25ml，混匀之后过滤，用微量加样器准确吸取 0.3ml 滤液置于 25ml 刻度试管中，并 加入 2ml 铜试剂，混匀。将试管置于沸水浴中加热 6min ，保持沸腾，加入 2ml 磷钼酸 试剂，之后继续加热 2min（从加入沸水浴开始严格按照时间加入试剂和移出冷却，用秒 表计时）。用自来水将试管冷却，加蒸馏水至 25ml，盖上瓶盖混匀。用分光光度计在 420nm 下读取吸收值，并记录。

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