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    二苯胺试剂鉴定DNA

    时间：2020-09-29 11:34:01 来源：蒲公英阅读网 本文已影响人 蒲公英阅读网手机站

    相关热词搜索：苯胺 试剂 鉴定

    　二苯胺试剂：鉴定 DＮA。

    　二苯胺试剂得配制

    　A 液：1。５ g 二苯胺溶于 1００ mL 冰醋酸中,再加 1５ mL 浓硫酸，用棕色瓶保存。如冰醋酸呈结晶状态，则需加温后待其熔化，再使用。

    　B 液：乙醛得体积分数为 0、2％得溶液.

    　配制：将 0、1 mＬ B 液加入到 10 ｍL A 液中，现配现用.

    　DＮA 得粗提取与鉴定

    　实验原理

    　1、 DＮA 在ＮａCl 溶液中得溶解度,就是随着 NａCl 得浓度得变化而改变得。

    　当ＮaＣl 得物质得量浓度为０、14 ｍol／L 时，DNA 得溶解度最低.利用这一原理,可以使溶解在ＮaＣl 溶液中得ＤＮA 析出。

    　2、ＤNA 不溶于酒精溶液,但就是细胞中得某些物质则可以溶于酒精溶液.利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少得 DNＡ。

    　3、DＮA 遇二苯胺(沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定 DNA 得试剂。

    　注意事项

    　1、步骤 3 析出含 DＮA 得黏稠物中,蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入,不能一次快速倒入。

    　2、实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但就是在不同得步骤中玻璃棒得用法不同。

    　实验用具

    　鸡血细胞液（５～1０ mL）;体积分数为 95%得冷酒精,蒸馏水，质量浓度为０、１ g/mＬ得柠檬酸钠溶液，物质得量浓度分别为 2 mol/L 与０.015 mol／L 得 NaCl 溶液,二苯胺试剂；烧杯(10０ mL，1 个, ５０ ｍL， ５０0 mL，各 2 个)，漏斗，试管（２0 ｍL,２个），玻璃棒,滴管,量筒（1０0 ｍL，1 个），纱布，镊子，滤纸，铁架台,铁环，三角架，酒精灯,石棉网,载玻片，试管夹。

    　实验原理:

    　1、析出溶解在 NaC１溶液中得 DＮA。

    　２、用冷酒精提取出含杂质较少得ＤNA.

    　３、DNA 在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。

    　方法步骤:

    　１．提取细胞核物质:顺时针方向搅拌，稍快,稍重. 5 ｍin

    　2.溶解 DＮA:

    　3。析出含 DNA 得黏稠物：蒸馏水３００mＬ,逆时针方向搅拌，缓慢

    　4。过滤：取黏稠物

    　５。再溶解:顺时针方向搅拌，较慢。３ ｍin

    　6。过滤:取滤液。

    　7．提取出含杂质较少得 DNA,逆时针方向搅拌，稍慢.5 min

    　８．DNA 得鉴定:沸水浴５min

    　【实验十二】DNA 得粗提取与鉴定

    　 实验原理

    　 DNA 在氯化钠溶液中得溶解度,就是随着氧化钠得浓度得变化而改变得。当氯化钠得物质得量浓度为 2 mol/L 时，DNＡ得溶解度最大，浓度为 0.１4 mol/L 时,ＤNA 得溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中得 DNA 析出.

    　 DNA 不溶于９5％得酒精溶液,但就是细胞中得某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少得 DNA。

    　DNA 中含有脱氧核糖,能与二苯胺(沸水浴)反应生成蓝色物质，因此,二苯胺可以作为鉴定 DNA 得试剂。

    　 目得要求 1、 学会 DNA 得粗提取与鉴定得方法。

    　２、 观察提取出来得 DNA 物质得颜色与形状。

    　材料用具

    　 材料：活鸡或鲜血鸡血。

    　 仪器:离心机、恒温水裕锅、载玻片，玻璃棒，滤纸，滴管，量简（100 mL,ｌ个),烧杯（10０ mL，l 个,50 mL、5０0 mL 各 ２个)，试管（２0 mL,2 个）,漏斗,试管夹,纱布.

    　 试剂:酒精得体积分数为 95%得溶液（实验前置于冰箱内冷却 24 h),蒸馏水,柠檬酸钠得质量浓度为 0。1g/mＬ得溶液,氯化钠得物质得量浓度分别为 2 mol/L 与 0．015 mol/L 得溶液，二苯胺试剂。

    　方法步骤

    　 实验前需要制备鸡血细胞液(由教师完成)，制备得方法就是：取柠檬酸钠得质量浓度为 0。1 g/ｍＬ得溶液（抗凝剂)1０0 mＬ,置于500 mL烧杯中.将宰杀活鸡流出得鸡血（约１80 mL)注入烧杯中,同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合,以免凝血.然后,将血液倒入离心管内，用 １000 ｒ/min 得离心机离。２ｍiｎ,此时血细胞沉淀于离心管底部。实验时,用吸管除去离。心管上部得澄清液,就可以得到鸡血细胞液.

    　 １．提取鸡血细胞得细胞核物质

    　 将制备好得鸡血细胞液 5 mL～１0ｍＬ，注入到 50 ｍL 烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水 20 mL,同时用玻璃棒充分搅拌 5 min,使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布得漏斗将血细胞液过滤至５00mL.取其滤液。

    　 ２．溶解细胞核内得ＤNA

    　 将氯化钠得物质得量浓度为 2 mｏｌ得溶液 40ｍＬ加入到滤液中,并摇动烧杯,使其混合均匀,这时 DNＡ在溶液中呈溶解状态。

    　 ３．析出含 DNA 得粘稠物

    　 沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现得粘稠物会越来越多.当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水(这时溶液中氯化钠得物质得量浓度相当于０、1４ moｌ/Ｌ）。

    　 4。滤取含 DNＡ得粘稠物

    　 用放有多层纱布得漏斗，过滤步骤 3 中得溶液至 500ｍL 得烧杯中,含 DNA 得粘稠物被留在纱布上。

    　 5.将ＤＮA 得粘稠物再溶解

    　 取 １个 5０ mL 烧杯,向烧杯内注入氯化钠得物质得量浓度为 2 mol／L 得溶液 ２0ｍL。用钝头镊子将纱布上得粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中。

    　 ６。过滤含有 DNA 得氯化钠溶液

    　 取１个１00 mL 烧杯，用放有两层纱布得漏斗过滤步骤 5 中得溶液。取其滤液,DＮＡ溶于滤液中。

    　 ７．提取含杂质较少得 DNＡ

    　 在上述滤过得溶液中，加入冷却得、酒精得体积分数为 ９５％得溶液 50ｍＬ(使用冷却得酒精，对 DNA 得凝集效果较佳）,并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少得丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起,并用滤纸吸取上面得水分。这种丝状物得主要成分就就是DNA 。注意观察丝状物就是什么颜色得.

    　8.ＤNA 得鉴定

    　 取两支20 mL得试管，各加入氯化钠得物质得量浓度为0.01５ ｍｏl/L得溶液5 ｍL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解.然后,向两支试管中各加入4mｌL 得二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热 ５ ｍin，待试管冷却后,观察并且比较两支试管中溶液颜色得变化。将观察得结果填写在《实验报告册》上。

    　 结论

    　 步骤８得 2 支试管中溶液颜色得变化说明了什么？将得出得结论填写在《实验报告册》上.

    　 讨论

    　 1。提取鸡血中得 DNA 时,为什么要除去血液中得上清液？

    　 2．步骤回与步骤 3 中都需要加入蒸馏水,两次加入得作用相同吗？为什么？ 3。ＤNA 得直径约为 20×10-1０ ｍ,实验中出现得丝状物得粗细就是否表示 1 个 DNＡ分子直径得大小？

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