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  • 珠宝销售工作总结

    时间:2021-03-02 12:11:08 来源:蒲公英阅读网 本文已影响 蒲公英阅读网手机站

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    珠宝销售工作总结 本文关键词:工作总结,珠宝,销售

    珠宝销售工作总结 本文简介:天马行空官方博客:http://t.qq.com/tmxk_docin;QQ:1318241189;QQ群:175569632珠宝销售工作总结光阴似箭日如梭,转眼间半年已经过去。回顾我们保安队在扬州国际珠宝城半年来的工作,可以说是成绩多多,受益多多,体会多多,但存在的问题也不少。为了更好地做好今后的

    珠宝销售工作总结 本文内容:

    天马行空官方博客:http://t.qq.com/tmxk_docin

    ;QQ:1318241189;QQ群:175569632

    珠宝销售工作总结

    光阴似箭日如梭,转眼间半年已经过去。回顾我们保安队在扬州国际珠宝城半年来的工作,可以说是成绩多多,受益多多,体会多多,但存在的问题也不少。为了更好地做好今后的各项工作,根据领导的要求,现对半年来保安队工作总结如下:

    一、关于上半年的工作

    我们是今年1月9日开始值班的。由于我们是一支新组建的团队,而且又是在扬州珠宝城这样一个大型的国际化企业里工作,责任重大,压力千钧。为了保质保量完成、履行好肩负的使命,上半年我们重点抓了三项工作。

    一是抓队伍建设。

    一支过硬的队伍是做好工作的重要保证,从保安队组建开始,我们在队伍建设上就坚持“两手抓”:一手抓人员的配备,一手抓素质的提高。在人员的配备上,我们从江西警官学校招聘了21名学生队员;同时,我们还注意从部队退伍军人中招聘优秀队员。通过半年的努力,我们团队的人数从当初的7个人,增加到现在的39人,是刚开始时的5倍之多。在队伍建设上,我们把“相马”、“赛马”、“驯马”、“养马”相结合。在多渠道引进队员的同时,高度重视队员综合素质的提高。凡新队员进来后,我们都要组织为期半个月的保安业务素质的训练。同时我们还专门邀请扬州市消防大队的专家,来为队员讲授消防方面的知识和技能,使队员都能尽快掌握各项基本的本领,达到上岗的要求。队员上岗后,我们还坚持每周2天的技能训练,风雨无阻,冷热不断,使队员的业务素质不断提高。

    半年来,我们保安队已成为一支拉得出,打得响,有较强执行力和战斗力,能出色完成任务的队伍。

    二是抓制度建设。

    工作的规范有序、卓有成效的关键是靠科学适用的制度作保证,“不以规矩,不成方圆”。团队组建后,我们对值班、交接班、学习、训练等方面都出台了一整套严格、实用的制度,对团队实行准军事化管理,用制度来规范大家的行为,用制度来保证工作任务的完成。如值班队员必须提前15分钟到岗进行交接;队员上下班都必须列队行进,充分展示军人的素质和风彩。

    三是抓思想建设。

    由于我们的队员来自不同的地方,不同的岗位,各人的综合素质、性格、爱好均不相同。更重要的是他们都刚20出头,血气方刚,这既是我们保安工作的需要,同时,也是我们在日常工作、生活中需要注意的。青年人可塑性很大,但是可变性也很大。因此,我们在队伍建设工作中,要把思想道德建设贯穿始终,紧抓不放。在工作方法上,我们根椐不同队员,不同情况,灵活机动地在班会、业务会上插入思想教育的以会代训,与队员个别谈心,交心,典型案例教育,举行升旗仪式等多种形式,灵活多样地实施思想品德的教育。如我们抓住人员雷鸣同志冒雨救伤员、拾金不昧的事迹,组织全体队员在学习的基础上,展开“人的价值在哪里?”、“怎样做一名政治合格、业务过硬的保安队员?”、“我认为一位合格的保安班长应是……”的大讨论,每个队员都能在学习、讨论的基础上写出有深度、有价值的体会文章,并且大多数队员都能把学习体会落实到具体的行动上。对工作中出现的问题和差错,我们要求:不得隐瞒,及时上报,有错必纠,有错必改,惩前治后,引以为鉴,强化精神,改进工作。

    形式多样的思想品德教育,收到了实实在在的效果。无论在工作上,还是在日常生活中,我们的队伍中出现了“三多三无”的喜人局面。即:工作积极主动的多,消极应付的少;干事情吃苦在前的多,讨价还价的无;做好人好事的多,违纪背法的无。

    二、半年工作的体会

    半年来的工作、学习和生活,我们取得了很多的成绩,也得到了锻炼和提高,可以说受益非浅。主要得益于以下几个方面:

    一是得益于公司领导的正确领导和悉心关怀。

    首先,张衍禄主任身为领导,在各项工作中都能走在前面,干在前,给广大队员树立了榜样,增添了干劲和信心;同时,张主任、李主任等领导曾多次亲临保安队,给队员讲形势、讲要求,讲保安业务和物业管理方面的知识,使广大队员深受鼓舞;更重要的是每一次大的活动,张主任等领导,都能亲临现场,组织指挥。所有这一切,都是我们保安队出色完成任务的重要的保证。

    二是得益于工作上的创新。

    我们是在扬州国际珠宝城从事保安工作的。扬州国际珠宝城是一个国际化珠宝产业平台,定位高端、规模宏伟,理念先进,这就要求我们保安工作必须与时俱进,不但要跟上,而且要走在珠宝城发展的前面,先一步,快一拍,否则就会被动,就会出问题。因此,我们在工作中,尽量不受习惯思维、习惯经验的干扰,从客观实际出发,批判地接受新的思维,坚持不断的创新,将创新作为做好工作的灵魂和动力。首先是在工作内容上创新。我们工作中,没有停留在对队员枯燥的制度要求和说教,而是把工作层面渗透到生活层面,从表象渗透到内心。当队员生病,或遇到困难时,只要我们知道的,我们都会尽力关心和帮助的,只要我们能做到的,都会全力去做,做不到的,也尽力想办法帮助。如一位队员的手受伤后,工作、生活受到影响,我们及时去看望他,给他送去饭菜,帮他洗衣服,同时,在工作上帮助调班,好让他安心养伤。当我们了解到队员过生日时,都会提前为他们订好蛋糕,并准时为他们举行小型的生日宴会。这种人性化管理,不仅使受帮助者个人深受感动,更使全体队员都能感到温暖,看到希望。其次是思想观念上的创新。我们采取典型事例的教育方法,全力引导队员不断地更新观念。如在报纸上,在公司内部发生的一些典型的、有一定说服力和教育作用的正反事例,我们都组织队员进行学习,同时,引导他们多问几个“为什么?”,收到了事半功倍的效果。使大多数队员对待工作的态度向敬岗爱业的方向转变。三是在工作方法上创新。工作方法在工作中尤为关键。面对日新月异的工作环境和工作要求,我们在工作方法上不断的创新,使工作的方法从严肃向灵活;从单一向多样;从会议讲向正常化;从说教向谈心,关爱转变。这种有益的创新尝试,事实证明是有效的、成功的。很多队员都能自觉打消临时观念,树立长期作战的思想,从而工作更安心、更用心。

    三是得益于全体队员的共同努力。

    我们的队员大多数是来自部队和警官学校,他们都不同程度地受过严格规范的军事化训练。他们在工作上,都能求同存异,顾全大局,无论工作条件多么艰苦,生活条件多么简陋,工作任务多么艰巨,他们大家都能团结协作,共同拼搏,想方设法尽心尽力完成任务,其精神实在感人。上半年我们之所以能在珠宝城大型活动多、情况复杂,天气不利的情况下,比较出色地完成各项工作任务,全体队员的共同努力功不可没。这些都凝聚着全体队员的智慧和汗水。

    三、存在的不足和今后的努力方向

    回顾半年来的工作,在取得成绩的同时,我们也清楚地看到自身存在的差距和不足。突出表现在:一是由于队员来自四面八方,综合素质参差不齐;二是我们的工作方法还有待进一步的创新和改进;三是工作上还存在一些不如人意的地方。所有这些,我们将在今后的工作中痛下决心,加以克服和改进,全力以赴把今后的工作做得更好、更出色。

    下半年及今后的工作要求将会更高,难度将会更大,这就对我们的工作提出了新的更高的要求。我们一定正视现实,承认困难,但不畏困难。我们将迎难而上,做好工作。具体讲,要做到“三个再创新”,“两个大提升”,最后实现“三个方面的满意”。即:在思想观念上再创新,在工作质量上再创新,在工作方法上再创新;在工作成绩上再大提升,在自身形象上大提升;最后达到让公司领导满意,让珠宝城领导满意,让来珠宝城的国内外领导、客商,顾客满意。

    以上是我们保安队XX年上半年的工作总结,不到、不妥、不对之外,恳请领导批评指正。

    篇2:服装销售工作总结

    服装销售工作总结 本文关键词:工作总结,服装,销售

    服装销售工作总结 本文简介:天马行空官方博客:http://t.qq.com/tmxk_docin;QQ:1318241189;QQ群:175569632服装销售工作总结在货品管理的过程中,我觉得最主要的是对销售环节的分析,做到细致,再以第一手的销售数据反馈设计及生产。先说销售:由于我服务的品牌的市场占有率不是强者姿态,所以,

    服装销售工作总结 本文内容:

    天马行空官方博客:http://t.qq.com/tmxk_docin

    ;QQ:1318241189;QQ群:175569632

    服装销售工作总结

    在货品管理的过程中,我觉得最主要的是对销售环节的分析,做到细致,再以第一手的销售数据反馈设计及生产。先说销售:由于我服务的品牌的市场占有率不是强者姿态,所以,在销售过程中,要极力争抢同一层次的竞争品牌的市场份额,要竭尽全力的苛刻。以我西单xx店的运动100店铺为分析对象,整个商场是以运动鞋为销售主体,并且整个商场的客流以运动年轻人为主,随着奥运会08年的北京召开,以及非典、禽流感对人们的警惕重用,人们对运动类的消费势必会大力发展。我在配货的时候,就要充分的加以搭配如:运动鞋+牛仔裤+休闲运动上衣组合。我周边的品牌,我确立的竞争品牌为牛仔裤jive

    、休闲上衣bossini。之所以选择他们为我们的主要竞争品牌,而不选择levi’s,lee,是因为我觉得竞争品牌为在一个战略发展进程中我们能够超越或被超越的品牌。在竞争过程中,在能够接受的利润范围内竭尽全力克制竞争品牌的发展。在竞争的过程中,主要运用的是概念战和价格战。不过,要灵活运用战术,不可鸡蛋碰石头,要避实就虚,灵活运用。比如,jive

    陈列的时候,推出一款牛仔裤,我就要用有较强价格优势和款式优势的牛仔裤和你对着干,他出什么,我克什么,如果,对方的竞争优势太强,我的利润不允许我做出盲目的行为,那么我就从他的软处进攻,不过,在双方交战的过程中,还要注意别的品牌的市场份额的抢占,以免别人坐守渔翁之利。在销售的过程中,货品的库存配比,及陈列一定要以整个货场的销售配比相适应,但是,还是全盘掌握一个气势的问题,比如,如果我的男T恤的销售份额占到了40%,女T恤的销售份额只占到20%,那么我切不可以将库存调整为男T恤40%,女T恤20%,因为如果这样调整,我的女装的气势将减弱,其销售轨迹必然会向50%和10%推进,如果,一旦,我的女T恤失去了气势,我的整个货场的销售必然会大幅下降。因为品牌的完整性极其重要,或者说是丰富性。在货品陈列方面,我觉得货场的入口一定要是一个开阔的容易进入的。因为整个销售的决定因素无非就是客流量和顾客在店的驻足时间。店铺的管理者一定要知道自己店铺的最畅销款是什么以及最出钱的货架是什么,店铺的发展不同阶段,所采取的陈列思想也是不一样的,如果在求生存阶段,那么就要用最畅销的款陈列在最出钱的货架上面,如果是奔小康阶段,就要采取畅销款和滞销款的不同组合已达到四面开花的景象。另外,现阶段最流行的陈列思想莫过于色系的搭配,但是,在色系的搭配过程中,一定要注意整体的布局,以及最小陈列单元格的陈列,再到整场组合的布局。在陈列的时候,一定要充分利用绿叶红花的组合,如果,但单纯的色彩重复组合,而没有画龙点睛的妙笔的话,整场的布局会出现没有焦点的尴尬局面。在店铺海报方面,一定要突现品牌的主题文化,设计来自于生活,反馈于生活,在概念营销方面,要告诉顾客我们的衣服是在什么样的场合穿的,以寻找与顾客生活态度上的共鸣。在销售方面收集销售的方面的数据,一定要各店铺分开对待,做到一家店铺一份资料,这样才能够最准确地反馈设计及生产。在销售过程中碰到的挫折要进行下一季计划的弥补。比如说,这一个星期,男T恤的销售只有10%的市场份额,要考虑为什么是10%,能够在下一季的销售过程中提升多少,15%或者其他?这个推断必须要有根据和战略的眼光。促销方面:促销要有计划的制定,而不应该盲目,在全季开季之前,就要制定好全年的促销计划,而不是盲目的跟随竞争品牌,被竞争品牌牵着鼻子走。

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    促销的形成有三点:1、节假日的促销;2、完不成商场保底的促销

    3、季末库存的促销。促销的优点:提高销售,降低库存。促销的缺点:品牌形象的顾客印象折扣。为了降低促销而给顾客带来的品评印象折扣,每一次的促销多要尽可能的给顾客一个降价的理由。促销的时候,还可以加入其他文化的介入,比如,与一个其他行业的强势品牌联合。每次促销之后,要进行及时地检讨和总结,把握接下来的货品流向问题。

    买货方面:

    1、以细节反推大围,再以大围推敲细节。

    2、上一季的优点一定要遗传下来,在微量的融合一些潮流变化的元素,以不变应万变。

    3、了解货品的销售周期,所有的销售应该是一个抛物线的形式,尽量提升抛物线峰值的高度和横向座标的长度。

    4、保证货品的完整性,但要尽量避免重复性。因为重复就会在自己的场子里面形成竞争。

    5、要纵观潮流的趋向性,比如现行的超女浪潮和奥运会的浪潮。

    6、对于货品尺码比例、颜色比例的确定要根据抛物线最峰值的上下一段周期内推算。而不应该是整季销售的比例。但是,又要注意完整性。

    7、对于新产品的投放,要试验性的投放,不能对新产品进行大规模的生产。只能对优秀的产品进行大规模的生产。代理商方面:要尽量的教导和辅助,换位思考,多为代理商考虑一点。在专业知识上面要尽量的与代理商共享。在数据分析方面要尽量完善的提供给代理商。要让代理商形成长远的目光。和让代理商看得到盈利的希望。在服装品质方面:要尽量的精益求精,最大程度的开发回头客。在团队合作方面要尽量的谦虚,对于下属要毫无保留的指导。以上是我对服装商品管理上面的一点点经验总结。由于文字的局限性,很多方面,还为能够全面展开。

    篇3:生物能源工作总结

    生物能源工作总结 本文关键词:工作总结,能源,生物

    生物能源工作总结 本文简介:生物能源工作总结本人于2009年1月初有幸担当生物能源项目主要研发人员,从参与生物能源专利的编写、修改、定稿和生物能源相关实验,在2010年4月末暂停此计划后,该项目共经过了16个月的时间,期间由于其他工作占据了一定的时间,致使该项目进行的时间较长。在此将此项目到目前为止所进行的阶段及工作做个总结。

    生物能源工作总结 本文内容:

    生物能源工作总结

    本人于2009年1月初有幸担当生物能源项目主要研发人员,从参与生物能源专利的编写、修改、定稿和生物能源相关实验,在2010年4月末暂停此计划后,该项目共经过了16个月的时间,期间由于其他工作占据了一定的时间,致使该项目进行的时间较长。

    在此将此项目到目前为止所进行的阶段及工作做个总结。

    实验一:藻种培养。

    目的:为基因提供宿体

    买回的小球藻藻种,以1/10的LB液体培养基,按1:10体积比扩种于

    100

    mL

    的三角烧瓶中,在恒温光照培养箱中培养,待藻体达到一定密度后待用。

    结果:小球藻扩增到近10L的量。

    实验二:ADH-PUC、PDC-PUC、FAEES-PUC质粒转化到大肠杆菌中扩增

    目的:所用质粒来源为黄教授提供,量较少,需大量扩增以备后续实验。

    1、

    制大肠杆菌感受态细胞:

    (一)、

    受体菌的培养

    从LB平板上挑取新活化的E.

    coli

    DH5α单菌落,接种于3-5ml

    LB液体培养基中,37℃下振荡培养12小时左右,直至对数生长后期。将该菌悬液以1:100-1:50的比例接种于100ml

    LB液体培养基中,37℃振荡培养2-3小时至OD600

    =0.5左右。

    (二)、

    感受态细胞的制备

    (

    CaCl2

    法)

    1)、将培养液转入离心管中,冰上放置10分钟,然后于4℃下3000g离心10分钟。

    2)、

    弃去上清,用预冷的0.05mol/L的CaCl2

    溶液10ml轻轻悬浮细胞,冰上放置15-30分钟后,4℃下3000g离心10分钟。

    3)、弃去上清,加入4ml预冷含15%甘油的0.05mol/L的CaCl2

    溶液,轻轻悬浮细胞,冰上放置几分钟,即成感受态细胞悬液。

    4)、

    感受态细胞分装成200μl的小份,贮存于-70℃可保存半年。

    2、

    转化,筛选:

    1)、从-70℃冰箱中取200μl感受态细胞悬液,室温下使其解冻,解冻后立即置冰上。

    2)、

    加入puc质粒DNA溶液(含量不超过50ng,体积不超过10μl),轻轻摇匀,冰上放置30分钟后。

    3)、42℃水浴中热击90秒,热击后迅速置于冰上冷却3-5分钟。

    4)、向管中加入1ml

    LB液体培养基,混匀后37℃振荡培养1小时,使细菌恢复正常生长状态.

    5)、将上述菌液摇匀后取100μl

    涂布于含Amp的筛选平板上,正面向上放置半小时,待菌液完全被培养基吸收后倒置培养皿,37℃培养16-24小时。

    同时做两个对照:

    对照组1:

    以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液,其它操作与上面相同。此组正常情况下在含抗生素的LB平板上应没有菌落出现。

    对照组2:

    以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液,但涂板时只取5μl

    菌液涂布于不含抗生素的LB平板上,此组正常情况下应产生大量菌落。

    结果:通过筛选得到了三种基因转化后的大肠杆菌

    实施例三:提取大肠杆菌中扩增的质粒

    目的:质粒存在于大肠杆菌中,需提取纯化,以备后续实验。

    1、

    挑取单菌落过夜培养活化:在含有抗生素的LB

    液体培养基中接种一单菌落,37℃150rpm摇培过夜。

    2、

    碱法提质粒:

    所需溶液与仪器:

    1)溶液I:50mmol/L

    葡萄糖、25mmol/L

    Tris-HCl

    (pH8.0)、10mmol/L

    EDTA(pH8.0),高压灭菌15min,4oC储存;

    2)溶液II:用时现配,0.4N

    NaOH、2%SDS等体积混合;

    3)溶液III:5M

    KAc

    60ml、冰乙酸

    11.5ml

    、ddH2O

    28.5ml。

    4)恒温摇床,台式离心机,制冰机,电泳装置,紫外透射观测仪。

    步骤:

    1).

    取1.5mL菌液于小离心管中,室温12

    000rpm离心1min收集菌体,弃去上清。加入100μl冰预冷的溶液I,剧烈振荡直至悬液发稠。

    2).

    加入200μl新配制的溶液II,温和颠倒5次,置冰上1-2

    min。

    3).

    加入150μl冰预冷的溶液III,温和振荡10s,置冰上5min。

    4).

    12

    000rpm,离心10min,转上清于另一管中,用等体积的酚/氯仿抽提一次,10

    000rpm离心2min,吸上清于另一管中。加入2倍体积100%乙醇,-20℃沉淀1hr。

    5).

    12

    000rpm,离心10min回收质粒DNA,用75%乙醇洗一次,超净台中吹干沉淀后溶于适量灭菌重蒸水中。琼脂糖凝胶电泳检测质粒的质量。

    3、

    电泳检测:

    1).

    制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml):称取0.7

    g(0.5

    g)琼脂糖置于锥形瓶中,加入70

    ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小烧杯.微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化,摇匀,即成1.0%琼脂糖凝胶液.

    2).

    胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.加入显色剂溴化乙锭50ul(剧毒,需带手套及口罩),混匀,将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层.室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加

    1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止.

    3).

    加样:在点样板上混合DNA样品和上样缓冲液,上样缓冲液的最终稀释倍数应不小于1X.用10

    ul微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品,应更换一个加样头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面.(注意:加样前要先记下加样的顺序).

    4).

    电泳:加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压60-100V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动.电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳.

    5)观察照相:取出凝胶,在紫外灯下观察,DNA存在则显示出红色荧光条带,采用凝胶成像系统拍照保存

    结果:通过电泳检测,得到了所需的三种带目的基因的质粒

    实施例四:酶切质粒得到目的基因

    目的:该质粒为天然提取所得,需将该质粒上的目的基因酶切下来,以备后续实验。

    酶切,连接表达载体。

    酶切体系:

    质粒DNA

    内切酶缓冲剂

    Xho内切酶

    Xba内切酶

    无菌水

    电泳检测:同实验三电泳检测步骤,

    回收纯化:以北京优博奥生物科技有限公司所生产的DNA凝胶回收试剂盒为例

    1).

    在紫外灯下割下含DNA的琼脂糖胶块(TAE

    或TBE凝胶),使它尽可能的小,放入1.5ml

    离心管中。大体积的凝胶块需要切成小块,以缩短凝胶融化的时间。

    2).

    根据凝胶浓度,按下表所提供的参数加GS

    Buffer:

    凝胶浓度

    GS

    Buffer体积

    <1.0%

    3倍凝胶体积

    <1.5%

    4倍凝胶体积

    <2.0%

    5倍凝胶体积

    如1.5%的琼脂糖凝胶重量为100mg,则应该加入400ul

    GS

    Buffer。

    3).

    悬浮均匀后置65℃水浴,每3分钟颠倒混匀一次,直至琼脂糖胶块完全溶化(约10mins)。

    按照GS

    Buffer体积的50%加入PH

    Buffer,充分混合均匀。将混合液转入到离心吸附柱,并将离心吸附柱置于废液收集管中,10,000rpm离心30s,去废液。

    4).

    将离心吸附柱置回废液收集管中,加入500ul

    W2(加入乙醇否?)于离心吸附柱中,10,000rpm

    离心30s,弃滤液。以同样的方法再用500ul

    W2溶液洗涤一次;

    5).

    将离心吸附柱置回废液收集管中,最高速度离心1min,以弃净W2。

    6).

    小心取出离心吸附柱,将其套入一个无菌的1.5ml

    离心管中,在吸附膜中央加入30ul

    EB(Eluent

    Buffer),室温静置2-5min后,最高速度离心1min。

    7).

    取出离心吸附柱,将1.5ml

    离心管(DNA溶液)置于-20℃保存备用。

    结果:通过电泳检测并回收纯化,得到了酶切完全的三种目的基因

    实验五:酶联目的基因与载体质粒PKY

    目的:基因与载体质粒连接后,可较稳固的转化到宿主中,并有效表达。

    连接体系:

    用Xho和Xba酶处理过的表达载体pKY171

    Xho和Xba内切获得的目的基因片段

    连接缓冲剂

    无菌水

    电泳检测:同实验三电泳检测步骤

    回收纯化:同实验四回收纯化步骤

    结果:通过电泳检测并回收纯化,得到了带三种目的基因的重组质粒

    实验六:重组质粒转化大肠杆菌中扩增:

    目的:酶连后的质粒量较少,需扩增,以备后续实验。

    1、

    制备大肠杆菌感受态细胞:同实验二制备大肠杆菌感受态细胞方法。

    2、

    转化,筛选:同实验二转化,筛选步骤。

    结果:通过筛选,得到了三种重组质粒转化后的大肠杆菌

    实验七:提取重组质粒并回收纯化

    目的:重组质粒存在于大肠杆菌中,需提取纯化,以备后续实验

    1、

    提取质粒:同实验三质粒提取方法。

    2、

    电泳检测:同实验三电泳检测步骤

    3、

    回收纯化:同实验四回收纯化步骤

    结果:通过电泳检测并回收纯化,得到了三种重组质粒。

    实验八:纯化后的质粒转化到农杆菌中

    目的:农杆菌用于侵蚀藻类,故需将质粒转化到农杆菌中,由于质粒转化到农杆菌中较困难,故先前重组的质粒只能在大肠杆菌中扩增后,再提取转化到农杆菌中。

    1、

    制备农杆菌感受态细胞:

    实验仪器、材料和试剂

    仪器:超净工作台,恒温摇床,冷冻高速离心机,高压灭菌锅,冰箱,70℃超低温冰柜,分光光度计,接种针,10ml

    试管,50ml

    离心管,1.5ml

    离心管,冰浴,微量进样器及吸头。以上玻璃仪器和离心管需在用前灭菌,灭菌条件:120℃,15分钟。

    材料:土壤农杆菌LBA4404菌株或其它农杆菌菌株

    试剂:

    YEB液体培养基(1L):酵母提取物1g,牛肉膏5g,蛋白胨5g,蔗糖5g,

    MgSO4.7H2O

    0.5g,pH7.0,高压灭菌;

    链霉素(Sm)储液:125mg/ml

    0.15

    N

    NaCl,高压灭菌。

    20mM

    CaCl2,高压灭菌。

    实验步骤

    1).

    挑取根癌农杆菌LBA4404

    单菌落于3ml

    的YEB液体培养基(

    含Sm

    125mg/l)中,28°C振荡培养过夜;

    2).

    取过夜培养菌液0.5ml接种于50mlYEB(Sm

    125mg/l)液体培养基中,28°C振荡培养至OD600为0.5;

    3).

    5000rpm,离心5min;

    4).

    加入10ml

    0.15N

    NaCl,使农杆菌细胞充分悬浮,5000rpm,离心5min;

    5).

    弃上清,置于冰上,加入1ml预冷的20mM

    CaCl2,充分悬浮细胞,冰浴中保存,24小时内使用,或分装成每管200ml,液氮中速冻1

    分钟,置70°C保存备用。

    2、

    转化,筛选:同实验二转化,筛选步骤

    结果:通过筛选,得到了三种重组质粒转化后的农杆菌

    实验九:农杆菌多次侵蚀藻类:

    目的:利用农杆菌的侵蚀能力,进行侵蚀藻类。

    藻类预培养(1-5天),农杆菌侵染(数秒钟),共培养(2-3天)筛选(培养基中加入抑菌抗生素和选择抗生素),抗性藻类的获得。

    结果:将含ADH-PKY农杆菌、含PDC-PKY农杆菌依次与小球藻共培养。通过筛选得到抗性小球藻。

    实验十:培养藻类

    目的:扩增藻类,以便检查目的基因是否表达,得到目的产物。

    以1/10的LB液体培养基,按10:1比例,恒温光照,培养小球藻

    结果:

    小球藻培养到500ml

    本项目目前已完成到生物能源各项专利的填写与申报,实验阶段做到了三种基因转化后的农杆菌与小球藻共培养阶段。

    由于工作调动,暂停该项目。

    未完成的实验有:

    实验十一:转基因藻类的检测。

    目的:基因转化到藻类中,

    需通过高科技方法检测基因是否在藻类中有效稳定的表达。

    实验十二:设定藻类中目的产物的获取工艺

    目的:藻类中基因表达的产物需通过有效的提取工艺来获得,以便降低成本。

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